Skip to content

Immunologiczne oczyszczanie szpiku za pomocą PCR przed autologicznym przeszczepem szpiku kostnego w przypadku chłoniaka z komórek B ad

3 miesiące ago

504 words

Immunofenotypowanie udokumentowało ekspresję antygenu B1 (CD20) we wszystkich nowotworach. Szpik kostny był reinfused po oczyszczeniu za pomocą przeciwciał monoklonalnych przeciwko komórkom B i króliczego dopełniacza. Próbki szpiku były kriokonserwowane w fiolkach przed i po oczyszczeniu. Genomowy DNA wyizolowano przez lizę komórek z niejonowymi detergentami i proteinazą K (Sigma, St. Louis). 30 Po lizie oczyszczone próbki przepłukano w pożywce zawierającej 2,5 mg dezoksyrybonukleazy na mililitr (Sigma), aby zapobiec zbijaniu komórek. Zapewniło to, że genomowy DNA z oczyszczonych komórek nie został oczyszczony podczas procesu ekstrakcji DNA. DNA wyekstrahowano także zgodnie z ustalonymi procedurami u 50 pacjentów. U 38 pacjentów wyekstrahowano go także przed i po oczyszczeniu z próbek, które nie były zamrożone; u 10 z tych pacjentów był on ekstrahowany z próbek uzyskanych po każdym z trzech cykli leczenia. U większości pacjentów komórki wyizolowane z diagnostycznych węzłów chłonnych poddano krioprezerwacji. Prawidłowy szpik kostny uzyskano od zdrowych dawców ochotników.
Przeciwciała monoklonalne
Anty-B1 jest mysim monoklonalnym przeciwciałem IgG2a o specyficzności wobec CD20, glikoproteiny powierzchniowej o wielkości 35 kd obecnych na prawidłowych i złośliwych komórkach B.31, 32 Anty-B5 to mysie monoklonalne przeciwciało IgM ze specyficznością dla aktywowanych komórek B i większość chłoniaków z limfocytów B.33. Anty-J5 to monoklonalne przeciwciało monoklonalne IgG2a ze swoistością dla antygenu ostrej białaczki limfoblastycznej CD10.34, 35. Wszystkie trzy przeciwciała indukują lizę komórek, gdy są stosowane z króliczymi dopełniaczami.
Marrow Purging
W latach 1982-1986 do badania zakwalifikowano pacjentów z infekcją szpiku o wartości do 5 procent, a płukanie przeprowadzono z samym anty-B1.36 W 1986 r. I później, u pacjentów z do 20% resztkową infiltracją szpiku po indukcji lub terapii ratunkowej były kwalifikujące się, a płukanie przeprowadzono z użyciem anty-B1, anty-B5 i anty-J5. Szpik kostny otrzymano w sposób opisany uprzednio.14. Frakcję komórek jednojądrzastych inkubowano z nasycającymi stężeniami przeciwciał monoklonalnych przez 15 minut w temperaturze 4 ° C. Komplement królika (ekstrahowany z surowicy królików w wieku trzech do czterech tygodni; Pel Freez, Brown Deer, Wis.) Został dodany w ustalonych rozcieńczeniach dla każdej partii i inkubowany z komórkami docelowymi przez 30 minut w 37 ° C w obecność dezoksyrybonukleazy (2,5 mg na mililitr), aby zapobiec zbijaniu komórek. Komórki zebrano przez odwirowanie i procedurę powtórzono dwukrotnie, w sumie w trzech cyklach obróbki. Komórki przemyto trzy razy, ponownie zawieszono w autologicznej surowicy i 10% dimetylosulfotlenku (Sigma) i zamrożono.
Linie komórkowe chłoniaka
Komórki Raji są ludzką linią limfocytów B chłoniaka Burkitta wyrażającą CD20, CD10 i B5. Ludzka linia limfocytów B chłoniaka DHL-6, która zawiera translokację bcl-2, była prezentem od Dr A. Epsteina (University of Southern California, Los Angeles).
Test klonogenny
Frakcję komórek jednojądrzastych zdrowego szpiku kostnego od zdrowych dawców izolowano przez wirowanie w gradiencie gęstości i napromieniano z szybkością 11,1 Gy na minutę, dla całkowitej dawki 40 Gy. Komórki Raji dodano do napromieniowanych jednojądrzastych komórek zdrowego szpiku w stosunku 1:20 i zawieszono w stężeniu 2 x 107 komórek na mililitr
[hasła pokrewne: modosa elbląg, unikol zabrze, duphaston ulotka ]

0 thoughts on “Immunologiczne oczyszczanie szpiku za pomocą PCR przed autologicznym przeszczepem szpiku kostnego w przypadku chłoniaka z komórek B ad”